Dans l'aile qui abritait les écuries du Chateau de Prague, transformée par l'architecte slovène Joze Plecnik en 1929, se trouve la Galerie d'Art (Obrazarna), héritière des collections d'art de Rodolphe II. L'empereur avait à son service une quarantaine de peintres italiens, allemands et flamands, et un réseau international d'antiquaires qui recherchaient avant tout des tableaux sensuels, ses favoris. La collection comptait environ 4 000 tableaux, mais après le sac de Prague pendant la guerre de Trente Ans, la collection fut largement dispersée.
La Galerie d'Art a été reconstituée grâce au rachat de nombreuses œuvres originales et peintures liées au goût impérial.
Parmi les nombreuses toiles exposées, on distingue une partie de la peinture allemande et des chefs-d'œuvre de maîtres vénitiens du XVIe siècle tels que Titien, Véronèse et Le Tintoret.
Un espace important est consacré au XVIIe siècle avec des peintures de Rubens et Guido Reni.
